Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐延展

从第一次造再次出现胰脏自身病原体到造再次出现1M-哮喘针灸征状的困难重重率在成人里面期就有很好的所述，多个胰脏自身病原体HIV的成人里面有70%在人体内转换后10年底患上哮喘，而随访15年的成人这一比重增高到84%。相对于之下，占多数针灸1M-哮喘一半以上的M-1M-哮喘的中风机制还没有受益应有的科学研究。

越来越多的人开始使用分期系统来定义1M-哮喘的困难重重：生物体在造再次出现多种胰脏自身病原体时重回第1期里面，造再次出现血糖间歇性时重回第2期里面，造再次出现征状时重回第3期里面。一些多发胰脏自身病原体HIV的生物体，在1期和2期，困难重重速度较慢，并发展为中风的1M-哮喘。我们前所述了一两组在首次检测到多种胰脏自身病原体取样后至较少10年无哮喘的亦非较慢困难重重者，这两组征状人数较少，但形态非常确切。随后，我们发现胰脏自身抗原特异性CD8+T终点站粒体底物在困难重重快速的征状里面基本不普遍存在，但在未来会中风和近十年普遍存在的哮喘征状里面很容易检测到。这可能表明，与困难重重征状相对于，这些征状免疫性底物的调节弱化。

以前科学研究表明，尽管调节性T终点站粒体(Treg)数量长时间，但哮喘征状普遍存在一些基本功能缺陷，其里面包括对IL-2的底物潜能下降。此外，哮喘征状里面的不稳定性CD4+T终点站粒体可能对调节凸显抵抗性，显造出为不稳定性T终点站粒体的诱发消散，自然产生的Treg和体外产生的诱导Treg，以及抗原经历的CD4+T终点站粒体里面IL-2底物消散。本科学研究的目的是所述了CD4+调节性T终点站粒体(Treg)在这群人亦非快速困难重重者里面的形态，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX科学研究是一项以人群为基础的中轴科学研究，在21岁请注意确诊的征状亲族里面体检1M-哮喘的小心因素。我们前所述了近十年快速困难重重者的形态，他们保持多重胰脏自身病原体HIV高达10年，但没有造再次出现哮喘的针灸征状，较慢性或非透过性免疫性。随后，10名在此期间保持无哮喘并想提供大量肠道取样的快速困难重重者不属于T和B终点站粒体基本功能数据分析。在迄今的科学研究里面，8名较慢困难重重者(SP两组)，里面位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁两者之间的胰脏自身病原体HIV。所有的行动者都处于1M-哮喘困难重重的1期，尽管一些人随后失去了胰脏自身病原体对某些抗原的HIV底物，然而，一名征状已经处于2期至较少6年，但没有造再次出现针灸征状，一名征状被诊断为哮喘，该受试者72岁，在采集实验取样时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据数据分析里面对该丝氨酸透过了直接分析报告。分离外周血单个核终点站粒体(PBMCs)，采用多参数流式终点站粒体术和T终点站粒体诱发试验分析报告丝氨酸里面Treg的频率、表M-和基本功能。使用FlowSOM和CITRUS(聚类检验、表征和回归)透过无指导聚类数据分析，分析报告Treg表M-。

结果：与生活品质丝氨酸相对于，来自较慢困难重重体的清醒CD4+T终点站粒体的指导聚类推测，激来时的清醒CD4+ Treg频率增高，与糖皮质激素诱导的TNFR系统性蛋白(GITR)解读增高有关。一名HbA1c升高的征状与困难重重快速者和归一化的比对两组相对于，Treg序有所相同。基本功能数据分析表明，与生活品质丝氨酸相对于，来自快速困难重重体的Treg介导的CD4+不稳定性T终点站粒体诱发相比损伤。显造出为对不稳定性CD4+T终点站粒体CD25和CD134解读的诱发增高。

所示1 侧重的表M-数据分析推测，CD4+Treg流感病毒在较慢困难重重缓冲区里面增高。由FlowSOM作用于的Treg室，周围在来自所有丝氨酸的来时CD4+CD45RA -终点站粒体上。根据标示造出物解读检验造出10个元簇:清醒T终点站粒体_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;清醒T cell_4;CD49b清醒T终点站粒体;HLA-DR + GITR +清醒T终点站粒体;存储器Treg_1;存储器Treg_2;存储器Treg_3;和存储器Treg_4。(a)使用9个相同Treg标示造出作用于的10个元簇的MST。每个数据流代表人一个战略性(100个战略性)，亦非大的元战略性(10个元战略性)在数据流两组周围上色。每个数据流里面的饼所示说明单个标示造出的解读级别。(b)每个元聚类的热所示，以推测整体标示造出解读。(c, d)为HD两组(c)和SP两组(d)作用于所示，以及FlowSOM识别的每个元簇的大块。(e-l)一般来说数量级为每个metacluster装终点站所示(数量级> 0.05%)确定为HD和SP两组:存储器Treg_2 (e),存储器Treg_3 (f),存储器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +清醒T终点站粒体(h)、清醒T cell_1(i),清醒T cell_2 (j),清醒T cell_3 (k) n d CD49b清醒T终点站粒体(l)。橘色圆圈代表人**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon归一化符号秩筛选。此键适用于所示形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

所示2 使用CITRUS的预测模M-证实，Treg频率的增高是困难重重快速的标志。分级去亦非化(a - f)和柑橘数据分析(g-k)来得SP行动者和归一化的HD行动者在CD4+CD45RA−T终点站粒体上的差别。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l生物体的代表人性所示。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR解读透过分离，模拟器FlowSOM生物体。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)两组以及丝氨酸SP 606(橘色)里面CD25+ cd127的频率统计所示。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+去亦非化孙子集的装终点站所示;(c) HLA-DRloGITR−(存储器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(存储器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(存储器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+存储器T cell)。(g - i)果树簇旋转由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3解读强度着色，箭头突造出的簇被识别为SP和HD缓冲区两者之间的相同。(j)装终点站所示推测了在SP(蓝点)和HD(灰点)两组里面，CITRUS清醒Treg_3和Treg_4的一般来说数量级(比重)。(k)直方所示推测每个簇的表M-(深蓝色)和Treg标示造出一般来说解读与背景解读(金色);上列，存储器Treg_3;请注意一行，存储器Treg_4。背景与所有其他簇里面标示造出的解读有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon归一化符号秩筛选

所示3 与生活品质献血者相对于，困难重重快速者清醒treg的GITR增高。每个清醒CD4+T终点站粒体元簇(清醒T终点站粒体_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;CD49b +清醒T终点站粒体;HLA-DR + GITR +清醒T终点站粒体;存储器Treg_2;存储器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检测每个解读标示造出的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)缓冲区的解读热所示(sp606不包括在内)。(c,d)清醒Treg_4元簇里面所有HD(白色)、所有SP(金色)和SP 606(橘色)的FlowSOM GITR解读相联，推测直方所示(c)和统计所示(d)。Wilcoxon归一化符号秩和筛选，p< 0.07(橘色)所有丝氨酸包括，p< 0.05(金色)丝氨酸SP 606和归一化的HD不包括在测试里面。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里面GITR解读，从分级去亦非化，从所有HD(白色)、所有SP(金色)和SP 606(橘色)相联，推测直方所示(e)和统计所示(f) *p< 0.05, Wilcoxon归一化符号秩筛选

所示4 来自快速困难重重的CD4+ treg终点站粒体控制不稳定性CD4+T终点站粒体的潜能下降。SP两组用金色的终点站和圆圈说明，HD两组用黄色的终点站和圆圈说明，橘色的终点站/圆圈说明丝氨酸sp606。使用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T终点站粒体透过分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被标示造出为CFSE, Treg按掩蔽的比重底物物。用抗CD3 /28微珠来时化终点站粒体，培育3翌日透过流式终点站粒体术检测。(a-d)与CD4+反之亦然者一般来说应的treg培育(增生)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD反之亦然者培育。(a,b,f) CFSE抑制(a,e)和CFSE诱发平均值(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的诱发平均值。使用HIV比对(激来时的响应终点站粒体不含treg)计算诱发平均值。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差数据分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重来得测试

所示5 不稳定性CD4+T终点站粒体对快速困难重重的T终点站粒体来时化的诱发更寻常。SP两组用金色的终点站和圆圈说明，HD两组用黄色的终点站和圆圈说明，橘色的终点站/圆圈说明丝氨酸sp606。使用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T终点站粒体透过分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被cfsel标示造出，treg按掩蔽的比重底物物。用抗CD3 /28微珠来时化终点站粒体，培育3翌日透过流式终点站粒体术(CD25反染)和终点站粒体因孙子数据分析。HD Treg与HD、SP或sp606反之亦然者一同培育。(a,b) CFSE抑制(a)和CFSE诱发前年(b)。(c,d) CD25诱发前年(c)和CD134诱发前年(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培育里面的解读。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差数据分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重来得测试

结论：我们得造出的结论是，来自快速困难重重孙子的来时化清醒CD4+Treg在GITR解读里面受益了扩展和丰富，强调了进一步科学研究Treg在1M-哮喘危险性生物体里面的一般而言的更进一步。

译文译文：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28